人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及基因转染

• 作者: 丁国斌 汤朝武 王波涛 陈璧 韩军涛
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞,培养的 干细胞 脂质体 哺乳动物腺病毒 转染
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 干细胞与创面修复
• 页码范围: 18-21
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2003.01.006

摘要

目的探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性.方法利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞,以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基,通过角蛋白19(K19)和整合素β1免疫组化染色、细胞周期分析及克隆形成率测定,对培养细胞进行鉴定.采用脂质体介导法,以含血管内皮细胞生长因子165(VEFG165)基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(pcDNA3.1/VEGF165)转染培养细胞;采用病毒载体介导法,以含报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺相关病毒载体(raav/GFP)转染培养细胞.应用免疫组化染色及荧光显微镜观察检测转染效果.结果人胎儿表皮干细胞呈明显克隆性生长,克隆形成率高,G1期细胞比例明显高于普通基底层角质细胞,K19和整合素β1免疫组化染色呈强阳性.pcDNA3.1/VEGF165转染的表皮干细胞VEGF165免疫组化染色阳性,raav/GFP转染的表皮干细胞呈现强荧光.结论利用Ⅳ型胶原快速贴附法及人胎儿成纤维细胞条件培养基,可初步实现人胎儿表皮干细胞的分离培养.以脂质体为介导或以腺相关病毒为载体进行人胎儿表皮干细胞的体外基因转染是可行的.