亮氨酸拉链结构蛋白基因的合成及其表达

• 作者: Keisuke Makino 何冬兰
• 来源期刊: 化学与生物工程
• 学科: 生物学
• 关键词: 亮氨酸拉链结构:基因合成 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 35-37
• 页数: 3页
• 分类号: Q756
• 字数: 1716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5425.2003.05.011

摘要

为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理,设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需的35个氨基酸的折叠片段,并将其克隆到Escherichia coli BL21表达.以ZG1(+)、ZG1(-)、ZG2(+)、ZG2(-)、ZG3(+)、ZG3(-)寡聚核苷酸片段在PCR自动热循环系统连接得到亮氨酸拉链蛋白基因片段,将此片段克隆到pET3b质粒中,酶切后用2%琼脂糖电泳检测证明克隆成功,将这种重组质粒转化到E.coli DH5α,发现pET3b重组体在E.coli DH5α中表达成功,从转化子中分离得到重组质粒pET3b,序列分析证明插入序列为合成的亮氨酸拉链蛋白基因;将重组质粒pET3b在E.coli BL21于5 mL含有50 μg*mL-1氨苄青霉素和34 μg*mL-1氯霉素的LB液体培养基中以IPTG为诱导剂,37℃下表达,10%SDS-PAGE检测到外源基因蛋白质分子量为4000 Da左右;重组体在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中、28℃时能大量表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何冬兰	中南民族大学化学与生命科学学院	48	170	7.0	10.0