亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达

• 作者: 何冬兰 牧野圭祐
• 来源期刊: 中南民族大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 亮氨酸拉链结构 表达 诱导
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 化学与生命科学
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4321.2002.03.002

摘要

酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链(bZIP)结构结合DNA的蛋白质之一,当GCN4二聚体与DNA结合时,亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构,而其基区由无规线团结构变为α螺旋.为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理,设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段,并将其克隆到Escherichia coli BL21,讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件.在蛋白质的小量表达试验中,重组子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨苄青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期,加入不同浓度的IPTG,继续培养以诱导蛋白质的表达,在不同的时间( 如:诱导前,诱导2,4,6,8 h) 取样100 μL到1.5 mL离心管中、离心收集沉淀,将沉淀悬浮于样品缓冲液中,用10% SDS-PAGE检测;在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达,根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间. 结果表明:含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时,0.1～0.8 mmol的 IPTG均可在2～10 h内诱导该蛋白质表达; 而大量培养时,0.2 mmol和0.4 mmol的 IPTG在37℃均不可能诱导表达,只在28℃时才表达; 小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4～6 h, 诱导剂 IPTG的浓度为0.2 mmol, 大量表达的温度为28℃而不是 37℃.