蜡样芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及重组酶性质

• 作者: 李红梅 段琳琳 陈宝珍
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 蜡样芽孢杆菌 克隆表达 亮氨酸脱氢酶 酶学性质
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 39-45
• 页数: 7页
• 字数: 3453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2015.04.007

摘要

本研究采用PCR技术从蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus基因组DNA中克隆出亮氨酸脱氢酶基因,构建重组表达质粒pET28α(+)-ldh,实现在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组亮氨酸脱氢酶的酶学性质.结果表明,从Bacillus cereus成功克隆的亮氨酸脱氢酶编码基因约为1 000 bp,表达的重组亮氨酸脱氢酶相对分子质量约为40 kDa.酶学研究结果表明:该酶的最适反应温度为37℃,其热稳定性好,30℃的半衰期长达330 h;最适反应pH为9.5;在pH7.0 ～8.0的缓冲液中保存24 h后仍保持原有酶活力的80％以上;金属离子Fe2+对该酶具有明显的促进作用,而EDTA强烈抑制亮氨酸脱氢酶的活性.动力学分析结果表明该酶对底物NADH催化的Km和Vmax分别为0.635 mmol/L和1.54 μmol/(L·min).亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的成功表达为手性氨基酸的生物合成提供了可能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李红梅	上海理工大学医疗器械与食品学院	37	126	6.0	8.0
2	陈宝珍	上海理工大学医疗器械与食品学院	4	3	1.0	1.0
3	段琳琳	上海理工大学医疗器械与食品学院	4	15	3.0	3.0