Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测

• 作者: 何智勇 廖威明 李佛保 李晓艳 盛璞义 谭美珍 黄纲
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 骨髓 干细胞
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 170-172
• 页数: 3页
• 分类号: R68
• 字数: 1981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0253-2352.2003.03.011

摘要

目的探讨利用Tet-on基因表达系统调控目的基因在骨髓基质干细胞中表达的可能性和量效关系,为利用该系统调控BMP基因在骨髓基质干细胞中的表达奠定基础.方法以荧光素酶(lucifrase)基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬间转染方法,将pTet-on调节质粒和pTRE-lucifrase反应质粒共转染骨髓基质干细胞,加入系列浓度的强力霉素(doxycyline)后,观察doxy-cyline的诱导效应.结果(1)pTet-on表达系统质粒DNA经HindⅢ单酶切、琼脂糖凝胶电泳后,可见6.02kb和1.38kb两个片段;pTRE-luciferase质粒经HindⅢ单酶切线性化,可见5.2kb的片段,均符合质粒图谱.(2)随着doxyc订ine浓度的增加,荧光素酶的活性也逐渐增加.未转染的骨髓基质干细胞虽经doxycyline诱导,但其RLU值与空白对照(蒸馏水)非常接近,说明未转染的骨髓基质于细胞不受doxy-cyline诱导.而转染的骨髓基质干细胞在未加入诱导剂时,其RLU(relative-luciferase-unit)值也接近空白对照值.结论转染Tet-on基因表达控制系统的骨髓基质干细胞对doxycyline诱导具有较好的反应性,目的基因荧光素酶基因的表达效力对doxycyline具有严格的计量依赖关系.因此,利用Tet-on基因调控系统对目标基因在骨髓基质干细胞中的表达进行调控是可行的.