HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测

• 作者: 伍志坚 卢大儒 吴小兵 薛京伦 邹蓓艳 陈浩明 陈立
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 医学
• 关键词: 重组腺相关病毒载体 人凝血因子Ⅸ小基因 杂合病毒 QC-PCR
• 年，卷（期）: 2003,（10）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1054-1058
• 页数: 5页
• 分类号: R552
• 字数: 4712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2003.10.014

摘要

构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体, 并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ). 经Southern dot blot及QC-PCR法测定, 滴度达到3.6 × 1012 vg(病毒基因组)/mL. 将rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中, 检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387 ng/mL血浆, 持续表达时间12周. 血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合. 实验结果表明, 采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题, QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确. RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染, PCR检测表明重组AAV注射后, 重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中, 未见扩散.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴小兵	中国预防医学科学院病毒学研究所	25	373	7.0	19.0
2	陈立	基因工程国家重点实验室复旦大学生命科学院遗传学研究所	1	5	1.0	1.0
3	邹蓓艳	基因工程国家重点实验室复旦大学生命科学院遗传学研究所	1	5	1.0	1.0
4	陈浩明	基因工程国家重点实验室复旦大学生命科学院遗传学研究所	1	5	1.0	1.0
5	伍志坚	中国预防医学科学院病毒学研究所	8	320	5.0	8.0
6	卢大儒	基因工程国家重点实验室复旦大学生命科学院遗传学研究所	1	5	1.0	1.0