端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体的构建和鉴定

• 作者: 傅攀峰 尹家俊 张锦瑜 胡祥 袁晓东
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒,末端转移酶 启动区(遗传学),基因治疗
• 年，卷（期）: 2003,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1274-1277
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 2997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2003.14.018

摘要

目的利用端粒酶逆转录酶基因启动子,构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体.方法通过PCR方法从pEGFP-N1质粒中扩增出绿色荧光蛋白基因并克隆到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上,命名为pLNCX-EGFP.设计含有特定酶切位点的引物,从人基因组中扩增出端粒酶逆转录酶基因启动子序列,将该序列片段定向克隆到已用限制性内切酶切除巨细胞病毒启动子的pLNCX-EGFP载体上,构建成端粒酶逆转录酶基因启动子调控的含有绿色荧光蛋白报告基因的表达载体pLNT-EGFP.将该表达载体pLNT-EGFP瞬时转染高表达端粒酶活性的HLF细胞株和不表达端粒酶活性的WI38细胞株,以检测端粒酶逆转录酶基因启动子的转录活性.结果表达载体pLNT-EGFP经酶切、测序分析证实与设计的完全一致.细胞瞬时转染结果表明,pLNT-EGFP能特异地在端粒酶阳性细胞中高效表达绿色荧光蛋白报告基因,而在端粒酶阴性细胞中不表达报告基因.结论成功构建了由端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞靶向表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡祥	大连医科大学附属第一医院普通外科	206	1093	16.0	22.0
2	张锦瑜	大连医科大学附属第四医院普通外科	6	20	3.0	4.0
3	尹家俊	大连医科大学附属第四医院普通外科	8	27	4.0	4.0
4	袁晓东		18	331	10.0	18.0
5	傅攀峰	大连医科大学生物化学与分子生物学系	5	55	4.0	5.0