微卫星标记位点的分离及其在美洲剑线虫群体分类鉴定上的应用

• 作者: HeYu MauriceMoens 李红梅 沈培垠
• 来源期刊: 检验检疫科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 微卫星标记 分离 美洲剑线虫群体 微卫星重复子 DOP-PCR 线形动物门
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 页码范围: 16-19
• 页数: 4页
• 分类号: Q959.17

摘要

在美洲剑线虫群体(Xiphinema americanum group)上，应用简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应(DOP—PCR)技术，克服了基因组DNA样本不足的难题，成功在微量基因组DNA条件下分离和标记了微卫星重复子(Micosatellice)。研究中，目标DNA片段被克隆前，DOP—PCR产物首先被连接到载体上，然后通过寡核苷酸(CA)9和载体上游引物，对包含微卫星位点的左侧DNA,片段进彳亏PCR扩增，该过程后的产物用于克隆和DNA序列分析；依据已分析的部分左侧序列，设计引物并与载体下游引物一起，对DOP—PCR产物再进行PCR扩增，使包含整个微卫星及其右侧连接部分被扩增，重复克隆和DNA序列分析并结合已分析的左侧序列，获得了包含全部微卫星重复子的DNA片段的完整序列。这种分离含微卫星标记位点DNA片段的路径新颖、高效，有效克隆率提高到了93.3％。研究中，发现和分析了9个包含微卫星重复子的片段，美洲剑线虫(X．americanum sensi stricto)和美洲剑线虫亚群组(X．americanum subgroup)的标记性引物被设计和检测。