应用细胞工程和转基因技术治疗糖尿病:"胰岛代理细胞"的构建研究

• 作者: 兰丽珍 方芳 蹇锐 邓华聪 郑宏庭
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因方法 糖尿病/治疗 逆转录病毒科 胰岛/细胞学
• 年，卷（期）: 2004,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7606-7608
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 1666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2004.33.047

摘要

背景:由于胰岛细胞分离技术难度较大,目前糖尿病细胞移植治疗尚缺乏理想的细胞来源.目的:构建具有生理性胰岛素分泌能力胰岛代理细胞系,为糖尿病基因治疗提供有效手段.设计:随机对照的实验研究.地点、材料和干预:本研究在第三军医大学附属新桥医院中心实验室进行.以携葡萄糖激酶(glucokinase,GK)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,MPIN)的逆转录病毒共同感染人肝癌细胞系HepG2细胞,G418筛选,放免法、Western-blotting及RT-PCR鉴定;挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌反应的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.主要观察指标:不同葡萄糖浓度条件下,联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞培养上清中的胰岛素浓度.结果:G418筛选3周获阳性细胞克隆,放免法、Western-blotting挑选出两个目的基因表达均较强的HepG2细胞1株,命名为细胞克隆"β";RT-PGR证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录;在细胞"β"中获得葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75～2.00mmol/L时出现胰岛素分泌高峰;而在单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞中,各种葡萄糖浓度引起的胰岛素分泌差异无显著性意义(P＞0.05).结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰丽珍	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	25	106	5.0	9.0
2	邓华聪	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	197	1595	19.0	31.0
3	郑宏庭	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	20	95	5.0	9.0
4	方芳	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	29	155	8.0	12.0
5	蹇锐	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	4	4	1.0	1.0