重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

• 作者: 夏文超 张晓彦 李素霞 田丽萍 袁勤生 龚毅
• 来源期刊: 华东理工大学学报(自然科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 羧肽酶原B 羧肽酶B 融合表达 分离纯化 胰岛素原C肽
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 387-391
• 页数: 5页
• 分类号: R931.6
• 字数: 3615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-3080.2004.04.006

摘要

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达.SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His.在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5 mg/L),比活为13.5 u/mg.用RP-HPLC分析胰蛋白酶+羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁勤生	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	151	1535	22.0	29.0
2	李素霞	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	54	259	9.0	14.0
4	夏文超	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	6	60	4.0	6.0
5	龚毅	中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心	35	288	11.0	16.0
6	田丽萍	中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心	4	130	2.0	4.0
7	张晓彦	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	9	59	5.0	7.0