重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化

• 作者: 刘景晶 吴洁 曹荣月 林洁 王学军 顾凯
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人源胰岛素原C肽 基因融合 表达与纯化 门冬酰胺酶 胰蛋白酶
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 174-180
• 页数: 7页
• 分类号: R944
• 字数: 390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2006.02.018

摘要

目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽.方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC.在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGSGR-C-peptide以包涵体形式高效表达.融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来.C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离.结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽.结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘景晶	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	116	553	12.0	18.0
2	王学军	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	6	19	3.0	4.0
3	顾凯	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	9	56	3.0	7.0
4	曹荣月	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	61	129	6.0	8.0
5	林洁	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	3	5	1.0	2.0
6	吴洁	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室	53	285	6.0	16.0