体外化学合成bcl-2 siRNA及脂质siPORT脂质体转染siRNA至细胞HL-60的鉴定

• 作者: 涂玉林 燕春艳 雷小勇
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 关键词: 病理学与病理生理学 RNA干扰 siRNA 双链RNA
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文摘要
• 页码范围: 208-208
• 页数: 1页
• 字数: 1400字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2004.02.041

摘要

目的为将RNA干扰技术深入应用到血液肿瘤做铺垫,体外化学合成bcl-2小干扰RNA(small-interference RNA, siRNA)及siPORT脂质体转染siRNA至细胞HL-60的鉴定.方法通过互联网从GenBank获得人bcl-2 mRNA全序列,经扫描bcl-2 mRNA的全序列记录AA及下游19个核苷酸肽并与基因组数据库比较去除与其它基因有高度同源性的序列,选取距离AUG启动子约30个核苷酸以后的靶序列作siRNA模板的设计,且GC含量控制在30%～65%之间.选择了三条序列作为我们实验设计的靶序列并由靶序列设计合成出它们的正、反义寡核苷酸肽模板.由化学合成试剂盒体外合成双链bcl-2 siRNA,纯化并定量后用Cy3红色荧光标记,利用脂质siPORT转染试剂将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞,转染48 h后收集并固定细胞,荧光显微镜下观察转染结果.结果纯化的siRNA经2%琼脂糖凝胶电泳证实其长度为21 bp,说明bcl-2 siRNA被成功合成.转染Cy3标记的siRNA 48 h后的细胞荧光显微镜下经绿色光激发可见较亮的深红色荧光,而未转染bcl-2 siRNA的细胞仅有微弱的红色自发荧光.结论体外成功化学合成bcl-2 siRNA,Lipid siPORT转染试剂能将bcl-2 siRNA成功转染入白血病细胞HL-60中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂玉林	南华大学心血管病研究所	41	168	8.0	10.0
2	雷小勇	南华大学药物药理研究所	102	531	13.0	16.0
3	燕春艳	南华大学心血管病研究所	3	5	1.0	2.0