脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞:筛选理想浓度

• 作者: 周风华 李丽君 李杰 杨萍 贾钰华
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脂质体 siRNA 转染 心肌细胞 心脏组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1239-1243
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 4404字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.07.023

摘要

背景:siRNA转染是完成RNA干扰的关键一步.目前用于心肌细胞的RNA干扰技术多以质粒为载体转染长链shRNA,其步骤复杂.脂质体转染化学合成短链siRNA是一种操作简便,低毒高效的转染方法,将其应用于心肌细胞转染,有利于RNA干扰技术的推广应用.目的:筛选脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的最佳浓度,以及简单高效的RNA干扰操作方法.方法:应用脂质体siPORT~(TM)>NeoFX~(TM)转染试剂介导5,10,20,30 nmol/L的CY3-Negative siRNA转染心肌细胞,同时设立空白对照组,转染24 h后分别应用荧光显微镜,流式细胞仪检测转染效率和细胞凋亡率,筛选最优浓度.根据优化浓度转染PHB siRNA,48 h后检测蛋白表达验证转染效果.结果与结论:随CY3-Negative siRNA浓度的增加,在荧光显微镜下观察到激发出红色荧光的细胞比例随之增加,流式细胞仪检测出各组平均转染效率也依次增高(P＜0.05),其中30 nmol/L组转染效率最高(P＜0.05),而各实验组与空白对照组之间的细胞凋亡率差异无显著性意义(P＞0.05).将心肌细胞转染30 nmol/L的PHB siRNA,48 h后PHB蛋白表达平均下降74.11%(P＜0.05).实验结果表明,脂质体转染试剂siPORT~(TM) NeoFX~(TM)介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的理想浓度是30 nmol/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨萍	南方医科大学中医药学院	15	125	6.0	11.0
2	贾钰华	南方医科大学中医药学院	61	516	15.0	22.0
3	李丽君	南方医科大学中医药学院	12	70	4.0	8.0
4	李杰	南方医科大学中医药学院	17	129	7.0	11.0
5	周风华	南方医科大学中医药学院	2	3	1.0	1.0