小鼠IL-23基因的克隆和在逆转录病毒中的表达

• 作者: 乔芳 单保恩 叶静 李宏 李巧霞 郝京生
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录病毒载体 IL-23 基因表达 包装细胞
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 152-155
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3062字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2004.02.016

摘要

从肿瘤组织(含有活化的淋巴细胞)提取总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得小鼠IL-23 cDNA.经DNA测序分析,证实该片段与GeneBank记载的IL-23 cDNA序列一致.将该目的基因插入LXSN逆转录病毒载体,并转染大肠杆菌DH5α中扩增,再感染ф2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞,经G418筛选后获得表达IL-23分子的PA317阳性细胞克隆.通过用PCR、RT-PCR及Northern blot技术检测目的基因表达,结果表明,成功地将鼠IL-23 cDNA插入逆转录病毒载体,经转染两种包装细胞产生了高表达IL-23的PA317细胞克隆.该克隆细胞产生的逆转录病毒可进一步用于转染肿瘤细胞,为制备肿瘤疫苗奠定了基础.