体外6种疱疹类病毒DNA扩增及其基因分型

• 作者: 余钟声 俞锡林 吕娟芬 宋莉莉 尚世强 董关萍 邵祝洪
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 依赖于DNA的DNA聚合酶 多态性,限制性片段长度 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: R751
• 字数: 3421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6680.2004.01.010

摘要

目的快速检测6种疱疹类病毒DNA.方法在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计两对通用引物,一对扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型、爱泼斯坦-巴尔病毒和人巨细胞病毒4种病毒,另一对扩增水痘-带状疱疹病毒和人类疱疹病毒6型2种病毒.经DNA聚合酶链反应(PCR)扩增,并对扩增产物进行分子克隆序列分析后,选择BamHⅠ或BstUⅠ酶切对扩增产物进行鉴别.结果6种标准病毒株PCR扩增后产物为510～592 bp,其最小检出量为0.1fg,与乙型肝炎病毒、真菌、细菌和人类基因组DNA无交叉反应.用该方法检测临床89份脑脊液(CSF)和75份血标本中的疱疹类病毒,13份(14.6%)CSF和26份(34.7%)血标本为阳性,通过BamHⅠ或BstUⅠ两种酶切后能明确系何种疱疹类病毒.同时用酶联免疫吸附(ELISA)法检测该标本的HSVⅠ/Ⅱ、EBV和CMV这4种病毒的IgM,10例阳性.这4种病毒的PCR阳性检出率为30.7%,而ELISA法为13 3%(P＜0.05),具有显著的差异性.38例正常健康儿童的血和9份非病毒感染的CSF标本6种疱疹类病毒DNA均为阴性.结论PCR加限制性内切酶片段长度多态性分析具有特异敏感,快速准确的特点,为疱疹类病毒感染的早期快速诊断提供了有效的手段.