产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

• 作者: 刘秀梵 张小荣 文其乙 梁光军 潘志明 焦新安 田银芳 高崧 高玉
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产气荚膜梭菌 α毒素 重组表达
• 年，卷（期）: 2004,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 573-576
• 页数: 4页
• 分类号: R378.8
• 字数: 3133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.07.005

摘要

目的利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素.方法设计针对α毒素基因的一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增出α毒素的全基因.经测序确认正确后,回收的α毒素目的条带与pGEX6p-1表达载体经限制性内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,进行连接,转化大肠杆菌BL21.诱导表达后,做SDS-PAGE电泳,出现特异的表达产物条带.表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验.结果构建的重组质粒经内切酶Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,发现特异的目的基因条带.SDS-PAGE电泳后,发现重组菌株有特异的表达条带.实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性.结论重组菌株BL21(pGEX6p-1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白.