人胰岛素原基因转染绵羊成纤维细胞及细胞株的建立

• 作者: 刘明军 张富春 王红梅 郭志勤 黄俊成
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 畜牧、兽医科学基础学科 成纤维细胞 传染 克隆 核型分析 绵羊
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 8-10
• 页数: 3页
• 分类号: S826.2
• 字数: 2367字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0258-7033.2004.01.004

摘要

从动物耳皮肤组织采样,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到100%.根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同,用0.05%的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化.通过脂质体介导,以BLG-hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因)基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白)基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞,经G-418筛选后,得到转染细胞.对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆,两种方法均可得到克隆细胞.选形态正常、生长均匀的5个细胞克隆进行PCR检测,结果5个克隆均转有GFP基因,其中两个转有BLG-hINS基因.高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后,染色体数目均为27对,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后,可以作为外源基因转染的有效供体细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张富春	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室	286	2034	23.0	31.0
2	刘明军	新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室	24	110	7.0	9.0
3	郭志勤	新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室	31	218	9.0	13.0
4	黄俊成	新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室	20	99	7.0	9.0
5	王红梅	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室	2	6	2.0	2.0