PTEN基因亚克隆和pTRE-PTEN反应质粒构建

• 作者: 刘新平 李霞 章翔 陈长春 黄安炀
• 来源期刊: 中华神经外科疾病研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PTEN 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 441-444
• 页数: 4页
• 分类号: R730.264
• 字数: 2645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2897.2004.05.016

摘要

目的亚克隆野生型与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶(PTEN)基因,构建四环素反应性元件调控的与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶反应质粒(pTRE-PTEN).方法以pBP-PTEN质粒为模板, 应用pfuDNA聚合酶,多聚酶链反应法(PCR)扩增PTENcDNA.将扩增的PTENcDNA与三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,然后将产物与pGEM-T-Easy载体直接连接;连接产物转化大肠杆菌DH5 α,蓝白筛选,挑选白色克隆作鉴定测序.将测序正确的pGEM-T-Easy/PTEN和带潮霉素筛选标记的四环素反应性元件质粒(pTRE2Hyg)分别双酶切,前者回收1.2 kb的PTEN片段,后者回收线性化的pTRE2Hyg片段,将两者连接成pTRE-PTEN表达重组体,转化大肠杆菌DH5α,抽提重组体质粒,经NotⅠ和SalⅠ酶切鉴定阳性克隆含有大小约6.4 kb和1.2 kb的两条带.结果成功地从pBP-PTEN质粒中亚克隆人PTENcDNA,并构建了pTRE-PTEN反应质粒.结论 pTRE-PTEN反应质粒的构建为建立pTet-on-PTEN-U87MG细胞系奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李霞	第四军医大学生物化学教研室	36	99	5.0	8.0
2	章翔	第四军医大学西京医院神经外科	461	2812	21.0	29.0
3	刘新平	第四军医大学生物化学教研室	133	841	16.0	23.0
4	黄安炀	第四军医大学西京医院神经外科	4	15	2.0	3.0
5	陈长春	第四军医大学生物化学教研室	1	1	1.0	1.0