巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

• 作者: 周宜开 唐朝晖 姚群峰 宁勇 康新江
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲基化 基因p16 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 89-92
• 页数: 4页
• 分类号: R44
• 字数: 3878字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2004.02.010

摘要

目的介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)法,探讨了最佳PCR扩增条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态.方法将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变.设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物,进行巢式聚合酶链反应扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段.结果在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化.用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)和nMSP法分别检测34例非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清,p16基因启动子甲基化阳性率分别为53%(18/34)和74%(25/34), nMSP法具有更高的灵敏度.结论筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析.