奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达

• 作者: 刘岳龙 秦爱建 许金俊 金文杰
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛 γ-干扰素基因 真核表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 273-277
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 4212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2004.03.007

摘要

应用RT-PCR技术从经体外植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出牛γ-干扰素(bovineinterferon-γ,BovlFN-γ)基因.将扩增出的BovlFN-γ克隆到PMDl8-T载体中,经过限制性酶切分析筛选正向插入的克隆.测序结果表明,所克隆到的基因编码区序列与已报道基因存在3个核苷酸的差异.将该基因片段从PMDl8-T载体中用HindⅢ和BamH I双酶切后克隆到真核表达载体pcDNA3.1/zeo(c)(+)中,构建真核表达载体pcDNA-BovIFN-γ,通过脂质体转染COS-1细胞,用鼠抗BovIFN-γ高免血清和FITC标记的羊抗鼠IgG进行间接免疫荧光实验(IFA)检测,结果表明,在COS-1细胞的细胞膜和胞浆内均有rBovIFN-γ表达,细胞病变抑制实验证实,转染后细胞培养上清液具有一定的干扰素活性,转染后72 h细胞培养上清液在MDBK细胞上抑制VSV病毒的效价可达到128IU/mL.研究结果为进一步筛选稳定表达BovIFN-γ基因细胞系、开发奶牛疾病预防控制的新产品以及开展奶牛疾病的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦爱建	扬州大学畜牧兽医学院	153	1966	21.0	38.0
2	刘岳龙	扬州大学畜牧兽医学院	57	1051	19.0	30.0
3	金文杰	扬州大学畜牧兽医学院	85	1181	18.0	31.0
4	许金俊	扬州大学畜牧兽医学院	72	401	12.0	16.0