奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达

• 作者: 刘岳龙 李瑞芳 秦爱建 许金俊 金文杰
• 来源期刊: 扬州大学学报(农业与生命科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 奶牛 淋巴细胞 γ-干扰素基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: Q513+.2|Q786
• 字数: 4244字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4652.2003.01.002

摘要

根据奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的cDNA序列设计1对引物,应用一步法逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段.将RT-PCR产物克隆到Pucm-T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的BovIFN-γ基因序列正确.将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体PGEX-6P-1谷光甘肽-S-转移酶基因的下游,经IPTG诱导后,表达出42 ku的融合蛋白,薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的25%.通过细胞病变抑制试验证实,融合蛋白具有较好的生物学活性,在牛肾细胞上抑制水泡性口炎病毒的活性可达到16384 U*mg-1, 有望成为预防和控制奶牛疾病的新产品.