SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达

• 作者: 刘定燮 周晓巍 黄培堂
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: COS7细胞 稳定表达 SV40表达载体 附加体DNA
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 79-83
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4066字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2004.01.014

摘要

为评价SV40载体/COS7稳定表达系统的可能应用价值,将含人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)编码区的SV40载体pctPA转染COS7细胞,并以G418选择培养28 d,得到稳定的抗性细胞库.Southem印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t-PA表达水平的变化.在经选择培养28d的COS7细胞库中,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在(300拷贝/细胞),t-PA的表达水平为1.1μg/d(106细胞).在随后3个月的动态观察中,随着细胞传代,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减,但在第1个月内可保持在1μg/d(106细胞)以上.基于SV40载体/COS7稳定表达系统无需筛选克隆,在稳定的抗性细胞库形成后的1个月内可能保持目的基因的高水平表达,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄培堂	军事医学科学院生物工程研究所	190	1493	20.0	30.0
2	周晓巍	军事医学科学院生物工程研究所	43	220	8.0	13.0
3	刘定燮	军事医学科学院生物工程研究所	3	54	2.0	3.0