基因表达谱芯片技术筛选XTP1基因转染细胞差异表达基因

• 作者: 刘妍 成军 杨倩 王建军 王春花 纪冬
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 X蛋白 基因芯片
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 24-27
• 页数: 4页
• 分类号: R512.62
• 字数: 4366字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2004.01.007

摘要

目的应用基因芯片技术,检测乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP1的表达对肝母细胞瘤细胞系HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明XTP1蛋白可能的分子生物学功能.方法设计并合成XTP1基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增XTP1基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的XTP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP1.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行cDNA芯片分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有3个基因表达水平显著上调,24个基因表达水平显著下调.结论应用基因表达谱芯片成功筛选了XTP1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明XTP1蛋白可能的生物学功能提供依据.