人前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆、原核表达、鉴定和抗原初步纯化

• 作者: 林天歆 江春 潘秋辉 许可慰 赵风进 韩金利 黄健 黄海
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 关键词: 前列腺肿瘤 癌 前列腺特异性膜抗原
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 533-536
• 页数: 4页
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1000-6702.2004.08.007

摘要

目的克隆中国人前列腺特异性膜抗原(PSMA)cDNA全长,构建PSMA原核表达重组子.诱导PSMA原核表达,并对表达产物进行初步纯化.方法从前列腺癌患者组织中提取总RNA,利用PSMA cDNA中的EcoR Ⅰ位点,将PSMA分为两段分别作RT-PCR,分别连接到pET-30a中,从而得到完整PSMA cDNA的原核表达重组子pET-30a-PSMA,并进行酶切鉴定与序列测定.确定序列正确后,利用IPTG诱导重组子表达,采用Ni-NTA Agarose螯合层析柱对表达产物初步纯化,SDSPAGE和Western-Blotting对表达产物和纯化产物进行鉴定.结果成功克隆到序列完全正确的人源PSMA cDNA,诱导表达并初步纯化出PSMA蛋白,该蛋白具有较好的抗原性和特异性.结论此项研究为PSMA功能的研究及前列腺癌噬菌体抗体库的筛选提供了实验依据.