细菌内同源重组构建和制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒

• 作者: 孙跃玲 涂远超 王家宁 黄从新 黄永章
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物工程 构建和制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒 同源重组 细菌 过氧化氢酶 基因 质粒
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 296-300
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2004.03.012

摘要

利用细菌内同源重组法构建制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒.先自过氧化氢酶质粒载体pZeoSV2-Cat中酶切出过氧化氢酶 cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-Cat,再转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-Cat;用PacⅠ酶切线性化pAdEasy-1-Cat,转染Ad-293细胞,包装成重组腺病毒颗粒;用氯化铯超速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒AdCat.结果发现,线性化的pShuttle-CMV-Cat转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,24 h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切鉴定说明pAdEasy-1-Cat构建成功.重组质粒经Ad-293细胞包装后产生的重组腺病毒经聚合酶链反应检测表明含有目的基因.氯化铯纯化获取的重组腺病毒滴度为4.12×1015 OPU/L .说明应用细菌内同源重组能快速构建含过氧化氢酶基因的重组腺病毒载体pAdEas-1-Cat,可高效制备均一的高滴度重组腺病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄从新		644	4360	27.0	39.0
2	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
3	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
4	涂远超		32	124	6.0	9.0
5	孙跃玲	郧阳医学院附属太和医院心血管内科	5	20	3.0	4.0