B7.1和B7.2基因真核表达载体的构建及在肝癌细胞中表达的实验研究

• 作者: 俞悦 印洁 李国强 王学浩
• 来源期刊: 中华肝胆外科杂志
• 关键词: 癌,肝细胞 基因重组 B7.1/B7.2 质粒
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 187-190
• 页数: 4页
• 字数: 3916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2004.03.015

摘要

目的构建含鼠源性B7.1和B7.2真核表达载体体系,研究其在肝癌细胞系CBRH7919中获得高效、稳定表达的方法.方法将目的基因全长cDNA分别亚克隆到真核表达载体PCI-neo中,获得B7.1和B7.2正向单拷贝插入重组子PCI-neo-B7.1和PCI-neo-B7.2,采用酶切法和测序法鉴定.采用阳离子脂质体将PCI-neo-B7.1/B7.2分别转染CBRH7919,经G418筛选,获得阳性克隆,命名为PCI-neo-B7.1/B7.2-CBRH7919+细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测目的基因在CBRH7919中的表达.结果 PCI-neo-B7.1/B7.2酶切后,电泳显示918bp和942bp 的目的基因片段和5.4kbp的线性化PCI-neo载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功.RT-PCR检测结果显示B7.1和B7.2均在PCI-neo-B7.1/B7.2-CBRH7919+中获得稳定表达.结论重组真核表达载体构建正确,并在肝癌细胞系CBRH7919中获得高效、稳定表达,为其在肝癌分子免疫治疗研究中应用奠定基础.