微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

• 作者: 吕建新 许艳芳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酶联夹心杂交 逆转录聚合酶链反应 一氧化氮合酶
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1950-1952
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 3178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2004.10.053

摘要

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS-mRNA进行定量检测.方法: 设计两条特异探针,其中一条为捕获探针,5'端连接氨基,能与微孔板表面的NOS 基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3'端带有生物素标记.用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24 h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(AV-HRP)及底物,在450 nm波长检测杂交信号.结果: 该方法检测iNOS-mRNA的灵敏度明显高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;精密度良好.结论: 本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于iNOS-mRNA的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新	温州医学院检验医学与公共卫生学院细胞与分子医学研究所	153	1535	21.0	32.0
2	许艳芳	温州医学院检验医学与公共卫生学院细胞与分子医学研究所	5	47	2.0	5.0