人IL - 6 mRNA的实时定量检测法

• 作者: 吕建新 季敬璋 左江成 王震 邹立林 郑晓群
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素6 RNA,信使 逆转录聚合酶链反应 TaqMan-MGB技术 牛膝多糖
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 206-208
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.01.052

摘要

目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达.方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α.提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品.建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法.(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达.结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上.(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好.(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高.结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新	温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室	153	1535	21.0	32.0
2	郑晓群	温州医学院附属第二医院检验科	47	192	8.0	10.0
3	邹立林	温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室	12	34	3.0	5.0
4	季敬璋	温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室	7	78	4.0	7.0
5	王震	温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室	18	98	5.0	9.0
6	左江成	温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室	4	34	3.0	4.0