实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用

• 作者: 仝佳 刘艳 刘青玲 史烨 杨先知 柳迎昭 王胜军 田洁 苏兆亮 许化溪 邵启祥 陈建国 马斌 马洁
• 来源期刊: 江苏大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-9 实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 292-295
• 分类号: R392.6
• 字数: 2815字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.04.004

摘要

目的: 建立检测人白介素-9 (interleukin-9,IL-9) mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR( real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)方法.方法: 分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC),经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA.扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品.采用qRT-PCR方法检测IL-9 mRNA的表达水平.评价该方法的线性及特异性,应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA 表达水平.结果: 建立了人IL-9的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法.该法的标准曲线相关系数r2为0.995~0.998,熔解曲线分析产物为单峰.Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(P0.01).结论:建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好,为进一步临床应用提供了实验基础.