鸡IL-6、IL-17和IFN-γ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张昆丽 滕丽琼 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鸡 IL-6 IL-17 IFN-γ 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1740-1745
• 页数: 6页
• 分类号: S854.45
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.10.1740

摘要

[目的]建立针对鸡白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验.[结果]GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2％、99.2％、102.0％和100.8％,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458.特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00％.[结论]建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台.