鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 孔留五 廖明 张小桃 张贺楠 曹伟胜 赖汉漳 齐岩
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 鸡 α-干扰素 β-干扰素 γ-干扰素
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 173-177
• 页数: 5页
• 分类号: Q511|Q503
• 字数: 2933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.02.016

摘要

根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α、-β、-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR Green Ⅰ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法.将IFN-α、-β、-γ基因克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析.结果表明,鸡IFN-α、-β、-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.990.熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4 h.建立的鸡IFN～α、-β、-γ基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础.