番鸭IFN-α mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 万春和 傅光华 施少华 朱海侠 程龙飞 陈红梅 黄瑜
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 实时荧光定量RT-PCR 番鸭 IFN-α β-actin
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: S858.322.4
• 字数: 2854字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中鸭IFN-α基因(GenBank登录号:JF894229)序列设计并合成引物,并以鸭β-actin基因(GenBank 登录号:GU564232)为内参,采用SYBR Green I染料法,建立检测鸭IFN-α mRNA的实时荧光定量Real-time PCR方法(RTPCR).将IFN-α和β-actin基因分别克隆至pMD 18-T载体上,鉴定出阳性重组质粒为标准品(p-IFN-α和p-β-actin),分别建立番鸭IFN-α和β-actin实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明,Ct值在13.27～27.54与11.86～25.32范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99 (r＞0.99),扩增产物的熔解曲线分析均各自只出现1个特异性单峰,无引物二聚体,Tm值分别为(93.6±0.26)℃和(85.3±0.15)℃,最低检测限分别为9.37×102 copies/μL和3.71 × 101copies/μL,检测周期从样品的处理到荧光定量PCR结束仅需4h左右.本研究建立的鸭IFN-α基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为番鸭IFN-α mRNA的定量分析奠定了基础.