猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 周艳君 姜一峰 安同庆 彭金美 田志军 童光志 肖燕 韦天超
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪 IFN-γ 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 168-172
• 页数: 5页
• 分类号: Q511|Q503
• 字数: 4439字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.02.015

摘要

为建立一种检测猪γ-干扰素(IFN-γ)的荧光定量RT-PCR方法,针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A(CyPA)的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针,以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18-T-CyPA为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR检测,并构建猪IFN一γ mRNA和CyPA的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明,建立的方法在1×101～1×107copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数r2均高达0.999,扩增效率均高于99.0%;可检测至少为100 copies的阳性标准品.该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可应用于临床样品的检测.