猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 万博 乔松林 刘永晖 张改平 王爱萍 王蕊 蒋志政 鲍登克
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 实时荧光定量PCR IFN-β基因 IRF-3基因
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 137-140,144
• 分类号: S828
• 字数: 3142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2012.05.035

摘要

为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBRGreen-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法.提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线.结果表明,β3-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997；溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL.建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础.