人TNF-αmRNA实时荧光定量PCR检测标准的构建

• 作者: 吕建新 邹立林 郑晓群
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子-α 核糖核酸,信使 逆转录-聚合酶链反应 T-A克隆
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 783-785
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3147字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆人TNF-α cDNA,作为人TNF-αmRNA定量检测的标准品.方法:用RT-PCR法从人外周血单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增TNF-α的cDNA,将纯化的TNF-α cDNA与pUCm-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后提取重组质粒DNA,用限制性核酸内切酶HindⅢ、EcoRI进行双酶切鉴定并测序分析,最后对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测.用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并检测λ260 nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品.结果:酶切鉴定、PCR扩增及测序分析均证实TNF-α cDNA重组到pUCm-T载体上.结论:成功克隆了TNF-α实时荧光PCR定量标准.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新	温州医学院检验医学与公共卫生学院	153	1535	21.0	32.0
2	郑晓群		47	192	8.0	10.0
3	邹立林	温州医学院检验医学与公共卫生学院	12	34	3.0	5.0