双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平

• 作者: 于洋 冯悦华 喻妙梅 姚霜 张俊 潘丽莉 罗光华 郑璐
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 双重荧光定量PCR 肿瘤坏死因子-α GAPDH
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 524-527
• 页数: 4页
• 分类号: R393
• 字数: 2347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y150190

摘要

目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法.方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成cDNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性.结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好.结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-α mRNA的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张俊	苏州大学附属第三医院综合实验室	66	258	9.0	13.0
2	郑璐	苏州大学附属第三医院综合实验室	27	73	5.0	7.0
3	于洋	苏州大学附属第三医院综合实验室	21	54	3.0	6.0
4	冯悦华	苏州大学附属第三医院综合实验室	12	16	2.0	3.0
5	姚霜	苏州大学附属第三医院综合实验室	5	6	1.0	1.0
6	喻妙梅	苏州大学附属第三医院综合实验室	4	7	2.0	2.0
7	潘丽莉	苏州大学附属第三医院综合实验室	5	9	1.0	2.0
8	罗光华		1	1	1.0	1.0