微量酶联夹心杂交法定量检测hIL-8 mRNA PCR扩增产物

• 作者: 吴晓宇 张黎明 李招云 王乐见
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酶联夹心杂交 白细胞介素 定量检测
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 555-557
• 页数: 3页
• 分类号: R392.12
• 字数: 2637字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA.方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5'端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被在微孔板内;另一条检测探针的3'端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合.提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号.结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1:256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%.结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李招云		26	121	6.0	10.0
2	王乐见		20	52	4.0	7.0
3	吴晓宇		15	87	6.0	9.0
4	张黎明		16	62	4.0	7.0