SV40T外显子的拼接及逆转录病毒载体pLLTSN的构建

• 作者: 李俊刚 王宇明 陈耀凯
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1104-1107
• 页数: 4页
• 字数: 4036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.05.023

摘要

目的:为构建肝细胞永生化载体,对猿猴病毒40大T抗原基因(SV40T)外显子进行拼接并以其为外源片段构建逆转录病毒永生化载体pLLTSN.方法:以质粒pUC19-SV40T为模板,高保真PCR扩增SV40T的2个外显子,重叠延伸拼接法将两个外显子拼接到一起,然后用双粘端连接法将其克隆到空载体pLXSN的EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点之间,通过菌落PCR和酶切法筛选,鉴定阳性克隆并经DNA测序验证.结果:拼接成2.1kb的SV40T,用菌落PCR和酶切法随机筛选的10个菌落中4个为阳性,均含有2.1kbSV40T插入片段.经质粒DNA测序分析的阳性克隆,确证无内含子.结论:获得重组的2.1kb无内含子的SV40T,成功构建了逆转录病毒载体pLLTSN.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宇明	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	55	380	11.0	14.0
2	李俊刚	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	5	19	3.0	4.0
3	陈耀凯	中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所	10	39	4.0	5.0