斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

• 作者: 张锡林 段文元 王英
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 斯氏狸殖吸虫 融合蛋白 半胱氨酸蛋白酶
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 720-723
• 页数: 4页
• 分类号: R383.2|Q556.9|Q786
• 字数: 3064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.08.019

摘要

目的获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽,对其免疫反应性作初步研究,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础.方法用PCR法扩增目的基因片段,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPoint T载体相连,并导入到大肠杆菌JM109菌株中去,诱导表达其编码的多肽片段.用裂解液制备抗原标本,经SDS-PAGE电泳后,经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况,Westernblotting鉴定其免疫反应性.结果转化实验共获得8株阳性重组子,经测序鉴定证实仅1株正向连接.经过诱导表达,制备重组抗原标本,经SDS-PAGE、转膜后生物素-链亲和素-碱性磷酸酶系统染色显示在32×103处有一融合蛋白条带,反向连接菌株与之相似,也出现一条表达带,但分子量远小于预期值,仅仅14×103左右.Western-blotting显示仅正向连接菌株在32×103的位置有一阳性染色条带.结论成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体,经过诱导后表达的重组抗原,具有良好的免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张锡林	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	117	382	10.0	12.0
2	段文元	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	15	58	5.0	7.0
3	王英	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	95	401	9.0	15.0