基因变构人白细胞介素-2克隆构建和原核表达

• 作者: 冯国基 王斌 郑长青 钱冬萌
• 来源期刊: 实用医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-2 基因变构 原核表达 DNA 重组
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 32-34
• 页数: 3页
• 分类号: R394.2|R3
• 字数: 2251字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4008.2005.01.020

摘要

目的构建基因变构IL-2(88N→R)的重组克隆,并将其在原核系统中进行高效表达,为研究基因变构IL-2(88N→R)的生物学活性奠定基础.方法分离人体T细胞经PHA刺激活化后,提取细胞的RNA为模板,逆转录构建cDNA文库,经套式PCR扩增出编码IL-2的基因,插入T-A载体后获得编码天然IL-2的克隆,核苷酸测序证实成功后,自行设计含有突变位点的引物,利用重组PCR技术,进行定点诱变构建基因变构IL-2(88N→R的重组克隆,DNA测序确认变构成功.将改构后的IL-2基因重组于原核pGEX-4T-2质粒上,转化宿主菌E.coli.DH5α中,经IPTG诱导后表达IL-2变构体,表达产物经SDS-PAGE电泳分析.结果获得了人类天然IL-2的编码基因克隆和基因变构IL-2的缩码基因克隆,并将变构IL-2(88N-→R)在大肠杆菌中获得了高效表达.结论 IL-2基因的成功定点变构及其在原核生物中获得稳定高效的表达,为进一步在真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型基因变构IL-2药物奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王斌	青岛大学医学院	240	1129	17.0	23.0
2	钱冬萌	青岛大学医学院	108	353	10.0	13.0
3	郑长青		12	29	4.0	4.0
4	冯国基		18	55	4.0	6.0