腺相关病毒rAAV-LacZ转导体外培养的骨髓内皮祖细胞

• 作者: 董长垣 谭最 郭淑芳 陈晓 陈锋
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺相关病毒 内皮祖细胞 β-半乳糖苷酶
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法研究
• 页码范围: 800-803
• 页数: 5页
• 分类号: Q26
• 字数: 3319字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8852.2005.06.035

摘要

目的:研究表达β-半乳糖苷酶的重组腺相关病毒(rAAV-LacZ)对于体外培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs)的转导效率.方法:将pAAV-LacZ、pAAV-helper、pAAV-RC用磷酸钙法共转染HEK293细胞,得到rAAV-LacZ;用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提法浓缩纯化病毒;用AVSachTM ELISA法rAAV2颗粒滴度测定试剂盒测定rAAV-LacZ的滴度;用不同MOI值(1.0×104 ～1.0×106v·g/cell)的病毒感染EPCs,48 h后,用β-Gal ELISA试剂盒测定β-半乳糖苷酶的表达,原位β-gal染色试剂盒染色,根据蓝染的阳性细胞占细胞总数的比率来估计rAAV-LacZ对于EPCs的转导效率.结果:rAAV-LacZ的滴度为9.6×1012v·g·ml-1;rAAV-LacZ对于EPCs的转导率约为60%,当MOI增加到106v·g/cell时,β-Gal的表达量增至(31.40±2.51)ng·mg· protein-1.结论:rAAV-LacZ能够有效的转导EPCs,这为AAV载体应用于细胞生长因子与EPCs联合治疗缺血性血管疾病提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈锋	武汉大学中南医院血管外科	101	591	13.0	21.0
2	谭最	武汉大学中南医院血管外科	51	184	8.0	11.0
3	董长垣	武汉大学医学院病毒学国家重点实验室	48	296	8.0	16.0
4	陈晓	武汉大学医学院病毒学国家重点实验室	40	455	8.0	21.0
5	郭淑芳	武汉大学医学院病毒学国家重点实验室	15	56	4.0	7.0