尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定

• 作者: 吴伟立 徐金森 方宏清 李彦英 苗林 陈惠鹏
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 尿酸氧化酶 重组蛋白质类 大肠杆菌 共价交联 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 124-126,131
• 页数: 4页
• 分类号: Q554|Q786
• 字数: 2837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.02.007

摘要

目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶.方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillus flavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urate oxidase,UO,EC 1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌 BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株.经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品.SDS-PAGE分析样品纯度.用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量.结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达 99%,其酶比活力可达35 U/mg.经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103.交联后相对分子质量为160×103.结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方宏清	军事医学科学院生物工程研究所	42	245	8.0	13.0
2	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
3	徐金森	厦门大学肿瘤细胞教育部重点实验室	17	251	9.0	15.0
4	苗林	军事医学科学院生物工程研究所	5	24	4.0	4.0
5	吴伟立	军事医学科学院生物工程研究所	3	18	3.0	3.0
9	李彦英	军事医学科学院生物工程研究所	11	39	4.0	6.0