人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定

• 作者: 江文正 胡雪菲
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒酶A 克隆 大肠杆菌 表达 活性测定
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 77-81
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.01.016

摘要

目的：克隆和表达人颗粒酶A（ Granzyme A，GzmA）基因的活性片段（ active Granzyme A，aGzmA）并进行活性鉴定。方法：以全长人GzmA基因为模板，PCR扩增aGzmA基因片段，限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后插入原核表达载体pET24a（＋），将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS－PAGE和Western blot进行分析。重组蛋白用镍层析柱亲和层析进行纯化后，利用BLT底物溶液进行活性鉴定。结果：PCR扩增得到长约700 bp的基因片段。重组质粒pET24a－aGzmA经酶切和测序证实aGzmA基因序列正确插入载体质粒中。 SDS－PAGE显示在26 kD处有一特异性蛋白条带。 Western blot证实该蛋白可与小鼠抗His 单克隆抗体发生特异性结合。利用镍柱亲和层析法可从包涵体中纯化得到纯度较高的重组蛋白，且具有较好的酶活性。结论：成功制备了具有生物学活性的人颗粒酶A重组蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江文正	华东师范大学生命科学学院	14	17	2.0	3.0
2	胡雪菲	华东师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0