人重组烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶2的表达、纯化及酶活力测定

• 作者: 任力 王之涵 赵亮
• 来源期刊: 川北医学院学报
• 关键词: 烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶-2 纯化 酶活力 轴突退变 神经保护
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 209-213
• 页数: 5页
• 分类号: R741.0
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-3697.2017.02.016

摘要

目的:通过大肠杆菌体系诱导表达烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶2(NMNAT2),并测定纯化的重组NMNAT2酶蛋白催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物合成的酶比活力.方法:在大肠杆菌BL21(DE3)体系优化条件下诱导表达NMNAT2重组蛋白,利用Ni-NTA Superflow Kit进行目的蛋白的纯化,Western blot法进行鉴定,并通过酶联荧光法测定其催化产物NAD,测定其酶活性.结果:人重组质粒NMNAT2-pET-24a可以在大肠杆菌BL21(DE3)体系中诱导表达.诱导条件为:LB培养液(卡那霉素,15 μg/mL)中37 ℃,IPTG(1.0 mM)诱导表达4 h.纯化获得的NMNAT2重组蛋白具有较高的酶活性.结论:NMNAT2-pET-24a可在大肠杆菌BL21(DE3)体系中稳定表达,优化条件下可获得较高活性的纯化NMNAT2重组蛋白,可用于神经保护功能及酶蛋白的活性调控研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亮	复旦大学附属上海市浦东医院神经外科	11	489	5.0	11.0
2	任力	复旦大学附属上海市浦东医院神经外科	5	15	2.0	3.0
3	王之涵	上海同济大学医学院	1	0	0.0	0.0