肉鸡谷胱甘肽 S －转移酶 A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化

• 作者: 卢晓晓 宁官保 张宁 张鼎 李娜娜 李欣 杨世雄 田文霞 赵宇军 闫芳 高荣琨
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 胫骨软骨发育不良 谷胱甘肽S －转移酶A3 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 3886-3892
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13842／j.cnki.issn1671‐8151.201809044

摘要

[目的]谷胱甘肽S－转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少. [方法]本试验采用RT‐PCR方法扩增肉鸡GST A3基因,连接pZeroBack／blunk克隆质粒,再与表达载体 pET‐28a连接,并转入 E .coli BL21 (DE3 )中获得pET‐28a‐GSTA3重组表达质粒,使用 IPTG 诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行 SDS‐PAGE鉴定,使用谷胱甘肽‐S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测. [结果]试验成功构建重组表达质粒pET‐28a‐GST A3 ,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa ,与预期一致,并且表达的重组GST A3蛋白具有生物活性. [结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础.