人谷胱甘肽硫转移酶Pi基因的克隆、原核表达和蛋白纯化

• 作者: 吴拥军 吴逸明 王智慧
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人谷胱甘肽硫转移酶Pi RT-PCR 基因克隆 序列测定 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1114-1117
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3125字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2006.06.034

摘要

目的:克隆人谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因并在大肠杆菌中实现高效表达及蛋白纯化.方法:用RT-PCR技术从人胎盘组织获取人GSTPi基因的cDNA序列,将其扩增产物GSTPi基因插入到原核克隆载体pMD18-T中,用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒pMD18-T-GSTPi进行鉴定,将测序正确的GSTPi基因连接到表达载体pMAL-c2x多克隆位点中,构建重组表达质粒pMAL-c2x-GSTPi,鉴定后,用异丙基-b-d-硫代半乳糖苷进行诱导表达,表达产物用麦芽糖亲和层析法纯化.结果:人GSTPi克隆到原核表达载体pMAL-c2x中,测序结果同GenBank序列比较,同源性为100%.通过诱导,在85 000的表达量约达到35%,麦芽糖亲和层析法纯化蛋白,纯度达到85%.结论:实现了解毒酶基因GSTPi的克隆和高效表达菌株的构建,并获取了高纯度的GSTPi蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴拥军	郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室	173	1075	16.0	23.0
2	吴逸明	郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室	201	1078	14.0	20.0
3	王智慧	郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室	9	30	3.0	5.0