重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化

• 作者: 李阳 江荣香 汤丽霞 王雄 郑楷
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: 卤醇脱卤酶 高效表达 T7表达体系 pBAD载体 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 3213-3219
• 分类号: Q814.1
• 语种: 中文

摘要

卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体.卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用.通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体叶,经测序鉴定后,将其转入大肠杆菌TOP10中,对其重组表达条件进行优化,以提高蛋白表达量.同时,对该酶在已构建好的T7表达体系中的表达条件也进行了优化.经酶活测定及SDS-PAGE分析,选择最优条件进行500 ml摇瓶的表达,在两种表达体系中,可溶性目的蛋白的含量均大大提高,占总蛋白含量35%左右.采用Q-Sepharose阴离子交换层析技术一步纯化,分别获得纯度为90%的卤醇脱卤酶34 mg和41 mg.同时,pBADHheC表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王雄	电子科技大学生命科学与技术学院	12	19	3.0	4.0
2	李阳	电子科技大学生命科学与技术学院	27	119	5.0	10.0
3	汤丽霞	电子科技大学生命科学与技术学院	7	47	4.0	6.0
4	江荣香	电子科技大学生命科学与技术学院	2	13	2.0	2.0
5	郑楷	电子科技大学生命科学与技术学院	3	36	3.0	3.0