人单酰基甘油脂肪酶基因的克隆表达、纯化及活性研究

• 作者: 张駪 朱京童 段宝玲 董爱华 路新华 郑智慧 郑海洲
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 肿瘤 人单酰基甘油脂肪酶 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传育种与生物合成
• 页码范围: 593-598
• 分类号: R979.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2012.08.006

摘要

目的 人单酰基甘油脂肪酶(human monoacylglycerol lipase,MAGL)是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶,是抗肿瘤药物研发的新靶点.为了建立高通量的MAGL抑制剂筛选模型,本研究对人MAGL进行了基因克隆、体外重组表达、纯化以及活性研究.方法 通过RT-PCR方法从人脑总RNA中扩增人MAGL基因,并将该基因克隆入pET28a(+)表达载体.将重组蛋白在E.coli BL21(DE3)宿主菌中通过lmmol/L IPTG诱导表达.表达产物用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行分离纯化,通过SDS-PAGE进行分析.以7-hydroxycoumarinyl arachidonate (7-HAC)为荧光底物进行酶的活性测定.结果 成功扩增出入MAGL基因,并构建了pET28a-MAGL表达载体.SDS-PAGE检测结果表明重组人MAGL蛋白在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的25％,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化后的重组蛋白纯度大于90％,其比活力达到7900IU/mg,,较纯化前提高了23倍.酶活性分析结果证明重组表达并纯化的蛋白具有单酰基甘油脂肪酶活性,另外,利用已知的MAGL抑制剂N-arachidonylmaleimide(NAM)对该酶表现出强的抑制活性,IC50值为0.53μmol/L.结论 本研究成功利用大肠埃希菌原核表达体系重组表达并纯化了入单酰基甘油脂肪酶,为建立以MAGL为靶点的抗肿瘤药物筛选模型奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董爱华	华北制药集团新药研究开发公司微生物药物国家工程中心	8	21	3.0	4.0
2	路新华	华北制药集团新药研究开发公司微生物药物国家工程中心	15	195	4.0	13.0
3	朱京童	华北制药集团新药研究开发公司微生物药物国家工程中心	4	65	2.0	4.0
4	郑海洲	华北制药集团新药研究开发公司微生物药物国家工程中心	9	48	3.0	6.0
5	郑智慧	华北制药集团新药研究开发公司微生物药物国家工程中心	11	20	3.0	4.0
6	张駪	四川大学生命科学院	1	1	1.0	1.0