新型酰基转移酶AT-EF080951的重组表达及底物结合分析

• 作者: 任娜 宗英 张兴群 焦炳华 焦豫良 王梁华 董晓毅 郭爱芸 高云
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 聚酮合酶 酰基转移酶 乙酰基转移酶 结合常数 组合生物合成
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 微生物药物筛选
• 页码范围: 140-144
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 研究新型聚酮合酶(PKS)基因簇EF568935(Gen Bank登录号)中酰基转移酶(AT)EF080951(GenBank登录号)底物特异性,为PKS的功能研究及组合生物合成研究提供新组件.方法 从酰基转移酶AT-EF080951结构域两端的连接肽区设计引物,通过PCR克隆其结构域基因at-EF080951;连接入原核表达载体pMAL-c2X,与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达;直链淀粉树脂柱亲和层析纯化MBP-AT-EF08095l;融合蛋白用Xa因子切除MBP,得到AT-EF080951单体;以MBP、小牛血清白蛋白(BSA)为对照蛋白,用紫外分光光度法测定MBP-AT-EF080951与AT-EF080951对底物的结合能力,计算结合常数(Ka,μmol/L),分析其结合底物的特异性.结果 (1)MBP-AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.0049±0.001;丙二酰辅酶A,0.0049±0.003;乙酰辅酶A,0.107±0.002;辅酶A,0.005±0.003.(2)AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.005±0.002;丙二酰辅酶A,0.0041±0.002;乙酰辅酶A,0.120±0.001;辅酶A,0.0042±0.003.结论 MBP-AT-EF080951和AT-EF080951都特异性结合乙酰辅酶A,AT-EF080951可能是乙酰转移酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦炳华	第二军医大学基础医学部	215	1714	20.0	33.0
2	王梁华	第二军医大学基础医学部	77	303	9.0	12.0
3	高云	第二军医大学基础医学部	28	87	6.0	7.0
4	宗英	第二军医大学基础医学部	25	29	3.0	4.0
5	张兴群	第二军医大学基础医学部	5	20	3.0	4.0
6	焦豫良	第二军医大学基础医学部	3	13	2.0	3.0
7	董晓毅	第二军医大学基础医学部	6	13	2.0	3.0
8	任娜	第二军医大学基础医学部	4	13	2.0	3.0
9	郭爱芸	第二军医大学基础医学部	2	8	1.0	2.0