抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达

• 作者: 乔媛媛 安云庆 张国民 王琰 陈宇萍
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗 p185 单抗 Fab 可变区基因
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 889-893,898
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4857字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达.方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和κ链的基因,重组到Fab表达载体中,在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab;根据前导肽序列设计引物,通过PCR介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列;以NIH3T3/erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定.结果:以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和κ链的基因,在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性,分别将Fd段和κ链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后,恢复了Fab段的抗原结合活性.单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性.但同时恢复κ链后活性却有所下降.结论:成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达,为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础;进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性,为今后以PCR方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔媛媛	海军总医院中心实验科	45	153	7.0	10.0
2	陈宇萍	海军总医院中心实验科	19	67	4.0	7.0
3	王琰	海军总医院中心实验科	59	302	9.0	14.0
4	安云庆	首都医科大学微生物学免疫学教研室	50	269	9.0	15.0
5	张国民	首都医科大学微生物学免疫学教研室	6	11	2.0	3.0